莱克多巴胺ELISA检测试剂盒操作指南

一、操作前准备

1. ‌试剂平衡‌
   取出试剂盒后，需在室温（20-25℃）平衡至少20分钟，避免试剂温差导致吸光度异常。
2. ‌仪器校准‌
   检查移液枪准确性（误差≤2%），建议使用专业校准工具或电子天平验证。

二、标准品与样本处理

1. ‌标准品梯度稀释‌
2. • 按说明书进行倍比稀释（示例浓度：180 ng/L至15 ng/L），每孔最终加样量为50μL。
   • 稀释时避免气泡产生，枪头需接触孔壁使液体自然流下。
3. ‌样本加样‌
4. • 样本孔加50μL待测样本（如尿液、组织匀浆液），若需稀释则加入40μL稀释液混合。
   • 空白孔不加样本或试剂，仅用于调零。

三、反应流程

1. ‌抗体结合‌
2. • 每孔加入100μL辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体，封板后37℃温育60分钟。
   • 温育时用不干胶密封板孔，防止水分蒸发。
3. ‌洗涤步骤‌
4. • 弃去液体后，每孔加满洗涤液（含0.05%吐温-20），静置1分钟甩干，重复5次。
   • 手工洗板需在吸水纸上用力拍干，避免残留液体干扰结果。

四、显色与检测

1. ‌底物反应‌
2. • 每孔依次加入底物A液和B液各50μL，37℃避光显色15-20分钟（颜色较浅可延长至20分钟）。
   • 显色过程需避光，避免底物提前分解。
3. ‌终止反应‌
4. • 加入50μL终止液（2M硫酸），5分钟内用酶标仪在450nm波长读取OD值。

五、结果分析

• 根据标准品浓度与OD值绘制标准曲线，计算样本中莱克多巴胺含量（吸光度与浓度呈负相关）。
• 检测下限参考：

  样本类型	检测下限
  尿液	0.05ppb
  肌肉（方法二）	0.05ppb
  饲料	0.5ppb

六、注意事项

1. ‌温度控制‌
2. • 最佳反应温度为25℃，高温或低温可能导致灵敏度偏差。
3. ‌试剂储存‌
4. • 未使用的酶标板需密封后4℃保存，标准品和底物液避光存放。
5. ‌避免污染‌
6. • 不同试剂批次不可混用，枪头、容器需一次性使用。
7. ‌质控要求‌
8. • 样本回收率应控制在80%-120%（组织/饲料）或95%±10%（尿液）。
   • 若0标准孔OD值＜0.5，提示试剂可能失效。

七、异常处理

• ‌显色异常‌：底液变色立即弃用，检查酶标板是否过期。
• ‌板孔干燥‌：洗板后立即进行下一步，避免干燥导致曲线失真。

通过以上步骤，可在45-60分钟内完成检测，适用于批量筛查。